產(chǎn)品簡介：

ACK 紅細(xì)胞裂解液(ACK Lysis Buffer)

在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞，去除紅細(xì)胞的方法有多種，如  ACK   Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞裂解液、Gey's Lysis Buffer。ACK 紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer)也稱 ACK Lysis Buffer，是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液，其主要有效成分為 NH4Cl。

ACK Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方，在裂解無核紅細(xì)胞的同時幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。對于裂解、去除有細(xì)胞核紅細(xì)胞，例如鳥或禽

類的紅細(xì)胞，效果不佳，裂解類似細(xì)胞時，不建議采用。本裂解液經(jīng)過濾除菌，經(jīng)過 ACK Lysis Buffer 處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測。

產(chǎn)品組成：

ACK Lysis Buffer    100ml     500ml      4℃

自備材料：

1、 胰蛋白酶

2、 離心機

3、 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液

操作步驟(僅供參考)：

(一)組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞

懸液，離心棄上清。

2、裂解: 加入 3～5 倍細(xì)胞沉淀體積的 ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 各一次。

5、洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸

沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

6、如有必要，重復(fù)上述步驟 5 一次，共洗滌 1～2 次。

7、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

(二)組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細(xì)胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞

懸液，離心棄上清。

2、裂解：加入細(xì)胞 5 倍細(xì)胞沉淀體積的 ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。

3、加入 15～20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

4、離心：4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2～4 各一次。

6、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

(三)血液樣本的常規(guī)操作

1、取新鮮抗凝血，400～500g 離心 5min，棄上清。

2、裂解: 加入 6～10 倍細(xì)胞沉淀體積的 ACK Lysis Buffer，輕柔吹打混勻，裂解 1～5min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。(特別提醒：對于鼠的血液，裂解 1～ 2min  已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至  4～5min，并且裂解過程中輕輕搖動 以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

3、離心: 4℃，400～500g 離心 5min，棄紅色上清。如無低溫離心機，本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、洗滌: 根據(jù)實驗要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4℃，400～500g 離心 2～3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

6、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意： 對于微量或少量的血液樣本，可以不用第 1 步操作，可直接加入 10 倍血液體積的 ACK Lysis Buffer 進(jìn)行第 2 步操作，并在 4℃或室溫裂解 4～15min。對于鼠的血液，裂解 4～5min 已經(jīng)足夠； 對于人的外周血，宜延長裂解時間至 10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入 10 倍體積的 ACK Lysis Buffer，輕輕吹打混勻，裂解 4～15min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解 4～ 5min 已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至 10min，但通常不宜超過 15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。）

2、加入 20～30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。

3、400～500g 離心 5min，棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。

注意事項：

1、制備細(xì)胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細(xì)胞懸液。

2、后續(xù)試驗如果是用于細(xì)胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。

3、離心步驟盡量在 4℃離心機上操作。

4、常規(guī)步驟不快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液  的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌    效果略差一些，同時需要大體積的離心管。

5、離心洗滌后，通常極微量的紅細(xì)胞不會影響后續(xù)的檢測。

6、如果經(jīng)過 ACK Lysis Buffer 處理后的樣品后續(xù)用于總 RNA 的提取，在處理細(xì)胞時不必使用 DEPC 處理的溶液，即無需在該操作中特意去除 RNase。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個月有效。