CCK-8試劑盒是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）而廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測的試劑盒。
CCK-8試劑盒產(chǎn)品用途
用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗。
CCK-8試劑盒基本原理
該試劑中含有 WST-8【化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2 H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan dye）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。
CCK-8試劑盒的使用及保存方法分享
1. 未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。
2. 使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。
注意：
試劑盒內(nèi)酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在*實驗后 1個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標簽為準，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
標本的采集與保存
1. 血清：
將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：
用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿：
1) 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液，稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2) 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行(有條件實驗室可選用機器勻漿);得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融 進一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2次)。
3) 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。
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