業(yè)執(zhí)照.jpg)
DH5α Competent Cell
DH5α感受態(tài)細(xì)胞
保存條件：-80℃保存。
組分說(shuō)明
Cat. No. YJ0808B
Size 10×100 μl
DH5α Competent Cell 10×100 μl
Control DNA pUC19，0.1 ng/μl 10 μl
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA 的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株，其 φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。 recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在 -80℃下保存，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 轉(zhuǎn)化所有步驟均在無(wú)菌條件下操作。
3. 包裝中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供對(duì)照試驗(yàn)使用。
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。
以 下 實(shí) 驗(yàn) 以 50 μl 感 受 態(tài) 細(xì) 胞 為 例 。2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量
的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕
輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個(gè)離心管中加入450 μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，150 rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
注意：1）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過(guò)離心（4,000 rpm，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2） 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3） 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng) 基進(jìn)行培養(yǎng)。
